操作方法

樣品處理：取樣品25mL（g）放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質杯內，制成1:10的樣品勻液，必要時用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調節樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入含有9mL稀釋液的試管內，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。

接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進行檢測。將菌落總數測試片（BB202）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右使培養基凝固，每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。

培養：將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養箱內，堆疊片數不超過12片。一般食品培養溫度為36℃±1℃，培養15～24h；水產品培養溫度為30℃±1℃，培養48h。

結果判讀

*在測試片上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數適中（30～300個）的測試片進行計數，乘以稀釋倍數后即為每毫升（或每克）樣品中所含的*菌落總數。

計數原則及報告方式

若只有一個稀釋度紙片上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個紙片菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每毫升(或克)樣品中菌落總數結果。

若有兩個連續稀釋度的紙片菌落數在適宜計數范圍內時，按式(1)計算:

N——樣品中菌落數；

∑C——測試片上(含適宜范圍菌落數的測試片)菌落數之和；

n1——*個適宜稀釋度測試片數；

n2——第二個適宜稀釋度測試片數；

d——稀釋因子(*稀釋度)。

若所有的稀釋度菌落總數均大于300CFU，則對稀釋度zui高的測試片進行計數，其他測試片可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以zui高稀釋倍數計算。

若所有的稀釋度菌落總數均小于30CFU，則應按稀釋度zui低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無菌落生長，則以小于1乘以zui低稀釋倍數計算。

若所有稀釋度的平均菌落數均不在30CFU～300CFU之間，其中一部分小于30CFU或大于300CFU，則以zui接近30CFU或300CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

菌落總數的報告

菌落總數在100CFU以內時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數字報告。

大于或等于100CFU時，第三位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數字，后面的0代替位數，也可用10的指數形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數字。

若測試片上一片紅色無法計數時，則報告多不可計。

若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結果無效。

稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。

表面取樣方法

加1mL滅菌磷酸緩沖液（或生理鹽水）在測試片上，至少靜置10S，使培養基凝固；提起上層膜，使*濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養箱內培養。

附加說明

菌落總數測試片檢測結果與傳統平板計數瓊脂平板法符合率可達80％以上，山東省疾病預防控制中心進行的驗證試驗表明，24h計數測試片上菌落數為平板菌落數的87％。

磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌：貯存液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15分鐘，或者放入消毒碗柜中消毒。

生理鹽水的配制與滅菌：取8.5g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000mL蒸餾水或純凈水中，先煮開后進行分裝，取9mL加入到10mL潔凈試管中，蓋上硅橡膠塞或棉紗塞，放入紅外線消毒柜中消毒。

保存條件

本產品需存放在4℃～10℃冰箱中，保質期為一年，鋁箔袋打開后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好，放到冰箱中，一個月內用完。在高濕度的環境中可能出現冷凝水，在拆封前將整包回溫至室溫